钱洁，赵小莉，徐妍，徐蓉
1.张家港市第一人民医院病理科，江苏张家港 215600；
2.张家港市第一人民检验科，江苏张家港 215600
据近几年数据统计结果发现，我国恶性肿瘤疾病的患病率、病死率均呈升高趋势。由于多数恶性肿瘤疾病早期症状表现较为隐匿，因此发现时多已发展至中晚期，从而错过最佳治疗时机[1]。另外恶性肿瘤患者一般身体各项机能减退，对病理活检的耐受性较差，因此，找寻一种准确、安全、便捷的肿瘤诊断技术已成为临床深入研究的课题。一般恶性肿瘤患者晚期会伴有胸腹水情况，这是因为恶性肿瘤在腹膜、淋巴道等处扩散，破坏静脉、淋巴管道，对腹膜、胸膜形成刺激[2]，提示可通过检验胸腹水中脱落细胞学诊断肿瘤性疾病。液基细胞学为常用肿瘤诊断方式之一，但无法判断肿瘤分型与来源，准确率不理想。细胞蜡块联合免疫组化可有效提高检出率，通过细胞蜡块延长保存时间，能保证检验结果的准确与稳定[3]。本研究选取2020 年5 月—2022 年5 月于张家港市第一人民医院就诊的62例疑似恶性胸腹水患者为研究对象，分析细胞蜡块、免疫组化联合诊断的应用价值，现报道如下。
1.1 一般资料
选择于本院就诊的62 例疑似恶性胸腹水患者作为研究对象，男39 例，女23 例；
年龄28～85 岁，平均（47.95±6.03）岁；
胸水患者51 例，腹水患者11 例。本研究取得医院医学伦理委员会批准。
1.2 纳入与排除标准
纳入标准：①临床诊断为疑似恶性胸腹水情况者；
②患者有明确病理诊断结果；
③患者同意配合该次诊断研究。
排除标准：①对检验方法不耐受者；
②沟通障碍者；
③排斥该次诊断研究者。
1.3 方法
1.3.1 液基细胞学检查方法对临床送检的新鲜胸、腹水先进行离心处理，以2 000 r/min 离心5 min，将试管内上清液弃掉，再向内部加入相较于沉淀物2～5 倍的缓冲液，以吹打的方式将其混合均匀。吹打处理后使用滴管取2～5 滴沉淀样本，将其滴于载玻片上，以巴氏染色法处理后实施液基细胞学观察。
1.3.2 细胞蜡块联合免疫组化检查方法对临床送检的新鲜胸、腹水静置20 min 后，轻轻弃去上清液，混匀后取50 mL 置于尖头离心管内，剩余部分放置于冰箱内冷藏保存备用，以3 000 r/min 离心5 min，弃上清液，如沉淀量不够，可反复离心收集，如有血性沉淀，可吸取白膜层，加入少量生理盐水，振荡均匀，以3 000 r/min 离心5 min，去除血细胞干扰；
将琼脂液加热溶解后备用；
向沉淀中加入等量的琼脂液，在琼脂凝固前快速搅匀，静置3 min，从离心管底取出琼脂块，用包埋纸包裹后放入自动脱水机中与常规组织一起进行脱水、浸蜡、包埋等过程，制成的细胞蜡块进行4 μm 切片及常规HE 染色，细胞蜡块保留备用。可根据需要切片，选择不同的抗体，用全自动免疫组化染色仪进行免疫组化染色。
1.4 观察指标
①胸腹水诊断结果分析。将活检病理诊断结果作为金标准，总结患者恶性胸腹水占比率及具体疾病。②诊断结果。记录两种诊断方案测定结果。③诊断效能。分别计算两种诊断方案的灵敏度、特异性与准确率。灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阳性例数）×100%；
特异性=真阴性例数/（真阴性例数+假阴性例数）×100%；
准确率=（真阳性例数+真阴性例数）/总例数×100%。
1.5 统计方法
采用SPSS 25.0 统计学软件处理数据，将[n(%)]作为计数资料记录结果的标准格式，进行χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。
2.1 恶性胸腹水病理诊断结果分析
62 例疑似恶性胸腹水患者通过活检病理诊断显示，52 例患者诊断为恶性胸腹水，占比83.87%。其中恶性胸水患者43 例，疾病诊断包括肺腺癌、乳腺癌、神经内分泌癌、胆管腺癌；
恶性腹水患者9例，疾病诊断包括卵巢癌、胃肠道癌转移。见表1。
表1 恶性胸腹水病理诊断结果分析[n(%)]
2.2 两种诊断方案的诊断结果分析
以活检病理诊断结果为金标准，液基细胞学、细胞蜡块联合免疫组化诊断结果见表2。
表2 两种诊断方案的诊断结果分析
2.3 两种诊断方案的诊断效能对比
细胞蜡块联合免疫组化对胸腹水诊断的灵敏度、准确率均高于液基细胞学，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。
表3 两种诊断方案的诊断效能对比（%）
液基细胞学是临床检查工作中较为常用的方式之一，样本制作后的细胞分布较为均匀，各结构的清晰度较高，经染色后可准确分辨，被广泛地应用于肿瘤类疾病的筛查工作中[4-5]。但随着现代医学的不断革新，对肿瘤细胞学检验的要求也在相应提升，其不仅需要在筛查时判断病变的良、恶性质，还需进一步确认细胞样本的来源、分型、时期等具体信息[6-7]。须要注意的是，实际开展该检查时，所获得的样本往往为单一细胞，无法分析其组织结构等特征，且容易受到采集操作、样本处理等的影响，导致最终检查结果出现偏差[8-9]。另外，部分情况下胸腹水中所包含的异常增生的间皮细胞在外形上和恶性肿瘤细胞相似度极高，单纯通过液基细胞学检查难以区分。而利用胸腹水样本经过石蜡包埋切片制作的样本，其细胞也更接近于真实的组织结构，并且还可根据实际情况开展免疫组化检查，使得整体实用性、效用性等均相对更高[10-11]。
细胞蜡块即是采集脱落的细胞样本，再经过脱水、浸蜡、包埋等处理后形成细胞蜡块，以此作为检验样本，供细胞学、免疫组化等检查操作使用。临床上针对胸腹腔积液、痰液、灌洗液等样本处理时均可使用，可充分固定其中所包含的组织碎块、细胞等，以保证多种生理、病理特征被详细观察。且经过石蜡包埋后，可实现重复性切片，以满足后续多种检查的需求，从而确保检查结果的准确性、敏感性[12-13]。临床较为常用的方式为直接固定法，但该操作会导致沉淀物中的细胞间黏度下降，导致组织碎块被大量分散，且松散细胞不容易被聚集，再经过后续脱水处理后便会导致细胞的分布更加松散，切片时产生严重丢失细胞数的情况[14]。
为此，现代细胞蜡块检查法经过改良后，先以琼脂进行预包埋处理，可大幅提升细胞间粘附的稳定性，从而在后期脱水处理前，使细胞的相对位置更加固定，分布也更加均匀[15-16]。且琼脂并不会影响染色效果，经过HE 处理后的细胞核、细胞质等染色效果较好，且各结构间对比度明显，细胞结构清晰可见。免疫组化染色背景无干扰因素，且细胞的分布较为均匀，可达到液基细胞学的效果，也可避免其检查技术的缺陷。将细胞蜡块和免疫组化检查联合后，能够有效增加胸腹水诊断的准确率，且染色检查还能够确定肿瘤细胞的分型情况。另外，应用琼脂预包埋时必须在其未凝固前完成混合操作，以确保细胞能够均匀地分布在琼脂内部，并对具有血性沉淀者给予特殊处理，以降低血细胞对检查的影响[17]。免疫组化诊断中，癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）本身是一种肿瘤标志物，其具有广谱特性，在临床诊断、检查肿瘤类病变时拥有较强的特异性，对于人体内是否存在肿瘤病灶能提供可靠的参考数据。健康人血液当中CEA 的含量通常较低，且使用免疫组化检验时的结果往往为阴性，如最终检查结果呈阳性，则可怀疑该受检者体内存在肿瘤病灶。Ema 则属于免疫组化指标之一，由于其主要是在上皮细胞膜中合成，因此也被称为“上皮膜抗原”。现代临床研究证实部分肿瘤细胞膜也会表达、合成Ema，在患病时可能呈现数值增加的情况。CK7 属于角蛋白中的一种，分子量相对较低，通常可用于对单层上皮细胞进行标记，包括卵巢、肺实质、乳腺等细胞异常增殖后均可被大量检出，可用于评估相关肿瘤类病变。细胞蜡块结合免疫组化技术极大提高了胸、腹腔积液的诊断率，不同病理类型原发肿瘤细胞免疫组化染色结果不同，鳞癌主要表达细胞角蛋白（CK5/6）和抑癌基因（P40），腺癌主要表达甲状腺转录因子（thyroid transcription factor 1, TTF-1）和天冬氨酸蛋白酶A（Napsin A），小细胞癌主要表达细胞角蛋白（cytokeratin, CK）和嗜铬粒蛋白A（CgA），恶性间皮瘤及间皮瘤主要表达钙结合蛋白（calretinin）和肾母细胞瘤（wilms tumor 1, WT-1）。并可依靠免疫组织化学特异性指标明确肿瘤组织来源，不同组织来源的肿瘤免疫组化染色结果也不同，肺腺癌组织主要表达细胞角蛋白CK7、NapsinA 和TTF-1，乳腺癌组织主要表达雌激素受体（estrogen receptor, ER）和孕激素受体（progesterone receptor, PR），胃肠道腺癌组织主要表达细胞角蛋白（CK20）、癌胚抗原（CEA）和肠道特异性转录因子（caudal-related homeobox transcription factor 2, CDX-2），卵巢癌组织主要表达糖类抗原125 蛋 白（carbohydrate antigen 125, CA125）、ER 和PR。
通过研究结果显示，细胞蜡块联合免疫组化诊断恶性胸腹水的准确率93.55%明显高于液基细胞学（P＜0.05），本研究结果与张煙等[18]研究所得结果“细胞蜡块联合免疫组化检出准确率48.24%高于液基细胞学31.58%”相一致。
综上所述，细胞蜡块联合免疫组化方式诊断胸腹水良恶性具有较高的灵敏度，可有效提高疾病检出准确率，为进一步制订治疗方案提供支持。
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